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超濾離心管的分子量選擇及使用前預處理方法介紹
點擊次數:704 發布時間:2021-04-13
  超濾離心管常用于做細胞培養上清的蛋白濃縮的實驗,它會有一個類似于內管和外管的兩個部分,內管中是帶有一定分子量的膜,當高速離心時,分子量比它小的就漏到下面的管子(即外管)中了,分子量比它大的就截留在上面(即內管中),這就是超濾的原理。
  首先要為大家介紹的是超濾離心管的分子量選擇:
  按照樣品量和目標分子量選擇適當的離心超濾管,為了得到收率,所選濾膜的截留分子量MWCO建議選擇所需截留分子大小的1/3左右,不超過目標分子量的一半。因為超濾膜上孔徑是平均孔徑,膜上的孔并非均勻,離心高壓下也可能滲漏,因此截留孔徑越小,流速越慢但截留比例更大。如果樣本濃度低體積大,可選擇較小容積的離心超濾管多次重復加樣離心。
  如果同時需要脫鹽和去除可溶小分子雜質,可將待濃縮樣品稀釋到離心超濾管大容積再離心,重復2次可除去99%鹽。避免過長時間或者過速離心,雖然高品質的產品都有防死端設計,可避免過度離心造成膜表面干而造成不可逆吸附。避免過度濃縮,體積越小,越容易因表面吸附而損失得率。離心后輕輕吹吸幾次濾膜截留的溶液,必要時補加一定體積的緩沖液沖洗膜表面,有助于減少膜表面吸附,能提高回收率。盡量避免接觸膜表面。
  那么,在使用超濾離心管時需不需要進行預處理呢?
  通常不需要預處理即可使用,不過對于蛋白質樣本處理,特別是較稀的蛋白質溶液來說(<10ug/mL),用超濾膜濃縮回收率常常是不定量的。對本產品表面做鈍化預處理可降低蛋白質在膜表面的吸附性損失,大多數情況下,在濃縮稀蛋白溶液之前預處理柱子可以提高回收率,因為溶液可填滿膜和表面暴露的空白蛋白吸附位點。
  希望上述內容能夠幫助大家更好的了解本產品的相關知識。
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